淋球菌實驗室檢查包括塗片, 培養檢查淋球菌、抗原檢測, 藥敏試驗及PPNG測定, 基因診斷。
(一)塗片檢查:
取患者尿道分泌物或宮頸分泌物, 作革蘭氏染色, 在多形核白細胞內找到革蘭氏陰性雙球菌。 塗片對有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者, 此法陽性率在90%左右, 可以初步診斷。 女性宮頸分泌物中雜菌多, 敏感性和特異性較差, 陽性率僅為50-60%, 且有假陽性, 因此世界衛生組織推薦用培養法檢查女病人。 慢性淋病由於分泌物中淋球菌較少, 陽性率低, 因此要取前列腺按摩液, 以提高檢出率。
咽部塗片發現革蘭氏陰性雙球菌不能診斷淋病,
(二)培養檢查:
淋球菌培養是診斷的重要佐證, 培養法對症狀很輕或無症狀的男性、女性病人都是較敏感的方法, 只要培養陽性就可確診, 在基因診斷問世以前, 培養是世界衛生組織推薦的篩選淋病的唯一方法。
(三)抗原檢測
1.固相酶免疫試驗(EIA):可用來檢測臨床標本中的淋球菌抗原, 在流行率很高的地區而又不能作培養或標本需長時間遠送時使用, 可以在婦女人群中用來診斷淋球菌感染。
2.直接免疫螢光試驗:通過檢測淋球菌外膜蛋白I的單克隆抗體作直接免
疫螢光試驗。 但目前在男女二性標本的敏感不高,
(四)基因診斷
1.淋球菌的基因探針診斷
淋球菌的基因探針診斷, 所用的探針有:質粒DNA探針, 染色體基因探針和rRNA基因探針。
2、淋球菌的基因擴增檢測
上面講述的探針技術檢測淋球菌的方法, 雖然比培養方法在靈敏度, 特異性和方便性上有了很大的提高, 但其仍有一定的局限性, 如多數情況下需要標本的淋球菌濃度很高, PCR技術和連接酶鏈反應的出現進一步提高了檢測淋球菌的靈敏性, 它具有快速、靈敏、特異、簡便的優點, 可以直接檢測臨床標本中極微量的病原體。
3. 臨床基因診斷淋球菌的注意事項
目前臨床檢測淋球菌的基因診斷方法主要採用PCR方法,
(1)引物設計 除了以上所列的淋球菌PCR引物外, 還可從在其它基因上設計, 但是引物序列應具有特異性。 因為細菌的染色體較大, 許多基因序列並沒有搞清楚;同時細菌之間或近或遠有一定的同源性, 而且細菌所含質粒序列間也存在同源性, 因此設計引物一定要進行基因資料庫比較分析, 同時進行特異性和靈敏性實驗, 從中選擇引物進行臨床檢測。
(2)臨床標本處理 對臨床標本來講, PCR範本要求越純越好。 這就要求在採集標本時要取到準確的位置, 對於無症狀患者要適當多採樣, 以保證採集到病原體細菌。 另外由於臨床標本成分比較複雜,
(3)PCR產物的檢測方法 不久以前臨床PCR檢測淋球菌幾乎都採用電泳的方法進行PCR產物的鑒定。 該方法存在許多問題, 如由於肉眼觀察的主觀性而造成假陽性和假陰性的結果。 目前用雜交顯色法代替電泳法, 提高了結果判斷的特異性和靈敏性。
總之, PCR方法與LCP方法比傳統的培養法在靈敏性和特異性上有了很大的提高, 時間也大大縮短。 隨著基因診斷技術的不斷改進。 PCR方法與LCP方法在淋球菌的檢測將會成為常規的檢測方法。
(五)藥敏試驗:在培養陽性後進一步作藥敏試驗。 用紙片擴散法做敏感試驗, 或用瓊脂平皿稀釋法測定最小抑菌濃度(MIC), 用以指導選用抗生素。
(六)PPNG檢測:β-內醯胺酶, 用紙片酸度定量法, 使用Whatman I號濾紙PP-NG菌株能使其顏色由藍變黃, 陽性為PPNG, 陰性為N-PPNG。