維生素B12主要生理功能是參與制造骨髓紅細胞， 當懷疑貧血由維生素B12缺乏引起時， 可通過實驗室檢查協助診斷， 常用方法主要包括以下幾種：
血清維生素B12測定：血清維生素B12的測定是最直接的鑒定方法， 常用微生物法及放射免疫法， 其中放射免疫法的敏感度和特異度均高於微生物法， 在臨床中應用廣泛。
【判斷標準】正常人血清維生素B12值為200～900pg/ml， 低於100pg/ml診斷為缺乏。
尿甲基丙二酸測定：維生素B12缺乏時體內甲基丙二酸量增多並從尿中大量排出， 但葉酸缺乏時其排出量並不增加， 常用於區分維生素B12缺乏和葉酸缺乏。
【判斷標準】正常人尿中僅排出微量尿甲基丙二酸， 維生素B12缺乏時排出量明顯高於3.5Mg/24H。
維生素B12吸收試驗：通過空腹口服57鈷標記的維生素B120.5μg， 2小時後肌注未標記的維生素B121Mg， 收集24小時尿測定排出的放射性。
【判斷標準】正常人排出的放射性鈷應超過7%， 低於7%表示維生素B12吸收不良， 惡性貧血常在4%以下。
