糖尿病腎病(DN)是糖尿病(Diabetes Mellitus, DM)的嚴重併發症之一。 隨著糖尿病發病率的增加, DN患者日益增多, 因其發病隱蔽, 進展緩慢, 如果任其發展, 當臨床上出現持續性蛋白尿時, 腎臟病變已不屬早期, 腎臟已出現了不可逆的病變, 再用藥物也無法逆轉。 因此, 早期發現糖尿病腎病有其十分重要的意義。 現簡要介紹三種糖尿病腎病的早期實驗診斷方法。
一、尿微量白蛋白檢測
(一)方法:競爭酶聯抑制法。
(二)實驗步聚:
1、用撲克制的抗菌素人白蛋白包被塑膠板。
2、加入不同濃度的標準抗原或待測樣品, 37℃溫育30分鐘。
3、加入底物溶液和終止液,
(三)結論:
此法快速簡便, 非常適合臨床常規使用。 但是其缺點是DM患者中尿微量白蛋白的陽性率較低, 在Ⅱ型糖尿病病人中, 陽性率不足20%。
二、尿銅藍蛋白檢測
(一)方法:酶聯免疫吸附測定法。
(二)實驗步驟:
1、銅藍蛋白抗體包被, 冰箱過夜。
2、加入不同濃度的標準抗原或待測樣品, 37℃溫育1小時。
3、加入酶標銅藍蛋白抗體, 37℃溫育1小時。 4、加入底物溶液和終止液, 在酶標儀上讀取A值, 即可算出待測標本濃度。
(三)結論:
該方法進行了精確性和穩定性實驗, 方法比較穩定可靠。 並對114名DM患者的尿銅藍蛋白含量及尿微量白蛋白含量進行相關分析, 兩者呈正相關, 且在尿微量白蛋白陰性的糖尿病病人中,
三、尿白蛋白片段的檢測
(一)方法:免疫印跡法。
(二)實驗步驟:
1、尿樣與樣品處理液等量混合, 置沸水浴3分鐘。 2、聚丙烯醯胺凝膠電泳, 每孔加樣20μι, 電壓200V。 3、將膠上的蛋白帶轉印到硝基纖維素膜上, 轉印電流340mA, 2小時後取出, 封閉1小時。 4、加入白蛋白抗體和酶標白蛋白, 冰箱過夜。 5、加入顯色液, 出現蛋白帶為陽性, 未見蛋白帶為陰性。
(三)結論:
通過實驗得出凡是尿白蛋白陽性者, 尿白蛋白片段也為陽性, 而尿白蛋白陰性者中, 仍有30%為尿白蛋白片段陽性。 曾有人對後者進行隨訪觀察, 發現他們中有18%發展為尿白蛋白, 蛋白陽性。 因此, 認為尿白蛋白片段具有更高的特異性和早期栓出率,
綜上所述, 除尿微量白蛋白檢測是目前人們較為公認的DN早期診斷指標外, 其它兩種都還在觀察及研究中。 目前國內外還沒有建立尿銅藍蛋白酶聯免疫測定方法, 市場上買不到試劑盒, 其作用機理還待於進一步深入研究。 免疫印跡法分析尿白蛋白片段, 在我院已應用於臨床, 對尿白蛋白陰性者, 再用本法檢測分析, 可以更有效地避免早期糖尿病腎病的漏診, 是預測腎臟病變的更為早期, 更為靈敏的指標。