流式細胞儀的應用原理

流式細胞術(Flow CytoMeter, FCM)是一種在功能水準上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段， 它可以高速分析上萬個細胞， 並能同時從一個細胞中測得多個參數， 與傳統的螢光鏡檢查相比， 具有速度快、精度高、準確性好等優點， 成為當代最先進的細胞定量分析技術。

工作原理:

將待測細胞染色後製成單細胞懸液。 用一定壓力將待測樣品壓入流動室， 不含細胞的磷酸緩衝液在高壓下從鞘液管噴出， 鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度， 這樣， 鞘液就能夠包繞著樣品高速流動， 組成一個圓形的流束，

待測細胞在鞘液的包被下單行排列， 依次通過檢測區域。

流式細胞儀通常以鐳射作為發光源。

經過聚焦整形後的光束， 垂直照射在樣品流上， 被螢光染色的細胞在雷射光束的照射下， 產生散射光和激發螢光。 這兩種信號同時被前向光電二極體和90°方向的光電倍增管接收。 光散射信號在前向小角度進行檢測， 這種信號基本上反映了細胞體積的大小;螢光信號的接受方向與雷射光束垂直， 經過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離， 形成多個不同波長的螢光信號。

這些螢光信號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內物質的濃度， 經光電倍增管接收後可轉換為電信號， 再通過模/數轉換器，

將連續的電信號轉換為可被電腦識別的數位信號。 電腦把所測量到的各種信號進行電腦處理， 將分析結果顯示在電腦螢幕上， 液可以列印出來， 還可以資料檔案的形式存儲在硬碟上以備日後的查詢或進一步分析。

檢測資料的顯示視測量參數的不同由多種形式可供選擇。 單參數資料以長條圖的形式表達， 其X軸為測量強度， Y軸為細胞數目。 一般來說， 流式細胞儀坐標軸的解析度有512或1024通道數， 這視其模數轉換器的解析度而定。 對於雙參數或多參數資料， 既可以單獨顯示每個參數的長條圖， 也可以選擇二維的三點圖、等高線圖、灰度圖或三維立體視圖。

細胞的分選是通過分離含有單細胞的液滴而實現的。

在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體， 充電後振動， 使噴出的液流斷裂為均勻的液滴， 待測定細胞就分散在這些液滴之中。 將這些液滴充以正負不同的電荷， 當液滴流經帶有幾千伏特的偏轉板時， 在高壓電場的作用下偏轉， 落入各自的收集容器中， 不予充電的液滴落入中間的廢液容器， 從而實現細胞的分離。