真菌培養的方法與直接鏡檢法相比較而言， 更能對大部分真菌感染的灰指甲作出準確的鑒定， 也是診斷灰指甲的一個很重要的手段。 下面我們就從培養基的選擇、培養時間、菌種鑒定三方面來瞭解一下灰指甲的真菌培養法。
1.培養基的選擇
通常培養真菌會同時選用兩種培養基， 如果單用一種培養基， 則容易忽略其它種類的真菌診斷。 常見的兩種培養基， 一種為沙氏葡萄糖瓊脂培養基中加抗菌劑， 常為氯黴素和放線菌酮；另一種是沙氏葡萄糖瓊脂培養基中僅加氯黴素， 不加放線菌酮。
2.培養時間
各種真菌的生長速度不同， 所以報告的時間也不同。 一般皮膚癬菌生長較緩慢， 在26℃-28℃的環境下需要培養2-4周才能發報告， 但是， 皮膚癬菌含蓋的菌種較多也需要區別對待；酵母菌生長較快， 通常2-3就可以發報告， 如果為陰性則需要觀察1周；黴菌生長也比較快， 一般2-4天就可以發報告。
3.菌種鑒定
（1）絲狀真菌：包括皮膚癬菌和黴菌， 根據菌落形成所需要的時間， 在不同條件下生長的情況， 菌落表面及背面的形態、色素， 培養基中有無色素， 培養物用乳酚棉藍染色後鏡檢找特徵性標誌結構。 （2）酵母菌：分為形態學鑒定及生化試驗。 形態學鑒定主要觀察有無假菌絲產生， 如有則為念珠菌屬， 如無則為念珠菌以外的酵母菌；生化試驗最為常用的是API系統，
