1、確診患嬰的依據
（1）紅細胞直接抗球蛋白試驗陽性：從患兒紅細胞上直接查到了被吸附的抗體， 證明紅細胞已經受累。 本試驗為直接證據。
（2）從紅細胞上釋放了具有血型特異性的抗體：
①用熱釋放法檢查AB0血型不合嬰兒的紅細胞是否釋放了抗A， 抗B， 抗A、B抗體或AB0血型系統以外的抗體。
②用乙醚釋放法檢查Rh血型不合的嬰兒紅細胞是否釋放了抗D、抗C或抗E抗體。 本試驗也為直接證據。
（3）血清中存在與患嬰紅細胞上抗原相對應的游離抗體。
2、輔助診斷依據
（1）高膽紅素血症：出生時臍血膽紅素超過85.8mol/L。 （50mg/L）， 24h血清膽紅素超過102.6Fmol/L。 （60mg/L）， 且以未結合膽紅素為主。
（2）孕母血清內查到與胎兒紅細胞不相合的完全抗體。
3、產前試驗如懷疑有HDN可能時， 最好在產前開始檢查， 以期及早診斷及採取適當的預防與治療措施。
（1）血清學檢查：首先要對孕婦做AB0血型系統及Rh系統的D抗原檢查及不規則抗體篩選， 所有篩選出陽性抗體都要區別是IgG或IgM， 並應進一步做抗體鑒定分析， 以確定是否會引起HDN。 因為抗體的存在並不一定都會發生HDN。
（2）羊水分析：有必要時， 並且在有條件的情況下可以做子宮穿刺抽取羊水進行分析， 檢查胎兒血型物質， 確定胎兒血型。 在450nm處測定膽紅素含量的吸光度值， 吸光度值越高表示官內溶血越嚴重。
