1、母種的培養
培養基的配製：多採用馬鈴薯一瓊脂培養基， 其配方是馬鈴薯250克， 蔗糖50克， 瓊脂20克， 尿素3克， 水1000毫升；按常規方法配製， 調節PH值到6－7， 分裝試管內， 包紮， 滅菌， 使其成斜面培養基。 純菌種的分離與接種：選擇新鮮、皮薄、肉白、質緊、有香味的成熟茯苓菌核作菌種， 先用清水洗淨， 然後移入接種箱內；月75%的酒精沖洗， 再用蒸餾水或冷開水沖洗數次， 用濾紙吸幹， 用小刀切開， 挑起中央白色茯苓肉一小塊， 放到培養基斜面上， 然後放入25－30度的恒溫箱或培養箱中培養5－7天， 待白色菌絲長滿斜面時， 即為純種。
2、原種的培養
母純種培養成功後， 不能直接用於生產， 還要擴大繁殖培養原種。 原種的培養基配方：小松木塊55%， 松木屑20%， 米糠或麥麩20%， 蔗糖4%， 石膏粉1%；加適量水， 調節PH值為5－6。 配製方法：先將木屑、米糠、石膏粉拌勻；另將蔗糖加水溶化， 放人松木塊煮沸30分鐘， 待松木塊充分吸收糖液後， 撈出；再將本屑、米糖、石膏粉等倒入液中， 拌勻；然後加入木塊， 拌勻， 以握之手指縫不出水為度。 然後分裝於500毫升廣口瓶中， 滅菌， 冷卻後即可接種。 接種方法：在無菌的條件下， 從母種中挑選出黃豆粒大小的母菌種放入廣口瓶原種中央， 即為原種。
3、栽培種的培養
栽培種培養基的配方為木塊66%， 松木屑10%， 麥麩或細糠21%， 葡萄糖2%， 石膏粉1%， 尿素0.4%， 過磷酸鈣1%， 加水適量， 調PH值5－6。 配製方法同上。
選窖與備松木料
選擇土層深厚疏鬆、排水良好的砂質壤土， 向陽坡地及未種過任何作物的生荒地、林地， 冬季將窖挖好， 窖長80釐米， 寬45釐米， 深30釐米， 窖與窖的間距為30釐米， 開好排水溝。
以松木為栽培料， 在農曆12月份砍下松樹， 去樹杈， 削去形成層的外皮， 露出木質部， 削皮留筋， 鋸成60—80釐米長的木段， 堆碼後乾燥， 約40天后， 無松脂分泌， 木心乾燥後即可接種。
